摘要：为了解云南省地方品种鸡群中禽白血病病毒（ALV）、禽网状内皮组织增生症病毒（REV）、鸡传染性贫血病毒（CAV）和禽脑脊髓炎病毒（AEV）的感染情况，采用ELISA方法对云南省滇东、滇西、滇中、滇南和滇北5个区域8个地方品种鸡群的2 295份血清样品进行了上述4种垂直传播病毒的抗体检测。结果显示：云南省8个地方品种鸡群中，ALV、REV、CAV和AEV平均抗体阳性率分别为27.02%、72.77%、98.47%和76.25%，二重、三重、四重感染率分别为32.90%、36.38%、15.90%；不同区域、不同品种鸡群中均存在上述4种病原的感染，抗体阳性率有一定差异，但无规律性。结果表明，云南省地方品种鸡群中4种垂直传播病毒感染率较高，流行面较广，且呈现严重的混合感染状态。结果提示：应重视这4种可垂直传播病原的流行控制，谨防因病毒混合感染导致重大疫病免疫失败；继续加强抗体检测，及时淘汰阳性鸡群，净化种群，同时定期进行疫苗污染监测，提升饲养管理水平，保障云南省地方鸡种质资源的安全健康发展。
禽白血病病毒（avian leucosis virus，ALV）、禽网状内皮组织增生病毒（avian retic uloendotheliosisvirus，REV） 和鸡传染性贫血病毒（chickeninfectious anemia virus，CAV）是鸡群中常见的免疫抑制性病原，可以感染多种禽类，造成免疫系统损伤和严重的免疫抑制，导致感染禽群生产性能降低或死亡；禽脑脊髓炎病毒（avianencephalomyelitis virus，AEV）主要侵害家禽中枢神经并引起非化脓性脑脊髓炎，导致感染禽群生产性能下降。这 4 种病毒均可垂直传播，且极易与其他病原和寄生虫发生混合或继发感染，给养鸡业特别是种鸡饲养业造成巨大经济损失。我国宁夏、湖北、广东、山东、吉林、重庆、浙江等多个省区市先后报道了 ALV、REV、CAV 单独或混合感染情况，其流行日趋严重。云南省具有丰富的家禽遗传资源，优质地方鸡品种较多。据流行病学调查，云南省茶花鸡群中存在 ALV 感染，昆明市地方鸡群中存在 REV 感染。为了解云南省地方鸡群这 4 种病原的流行情况，2019 年对云南省 5个区域的 8 个品种地方鸡群，采集血清样品进行了ALV、REV、CAV 和 AEV 血清学检测，以期为这4 种病毒病预防提供数据支持。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验样品 2019 年从滇东（昭通、文山）、滇西（大理）、滇中（楚雄）、滇南（红河绿春）和滇北（丽江、迪庆）5 个区域，选取 8 个各区域主要地方品种（南涧乌骨鸡、尼西鸡、云龙矮脚鸡、绿春黄连鸡、宁蒗高原鸡、武定鸡、文山土鸡、盐津乌骨鸡）种鸡场，翅静脉采集血清进行抗体检测。
采样鸡群未进行 ALV、REV、CAV 和 AEV 免疫，且未见这 4 种病原感染的明显发病症状。采样时，参考多省区市检测结果，采用估计流行率抽样法，设置信水平 95%、可接受误差 10%、预期流行率50%，对照统计学中大群体估计患病率样品抽样表（Cannon 和 Roe 二氏，1982），确定最少抽样样品数为 96 份。综合考虑不同品种鸡场存栏规模，在各品种鸡场采取随机抽样方式，共无菌采集2 295 份血清样品，其中南涧乌骨鸡 610 份、尼西鸡 300 份、云龙矮脚鸡 300 份、绿春黄连鸡 260 份、宁蒗高原鸡105份、武定鸡300份、文山土鸡130份、盐津乌鸡 290 份。
1.1.2 诊断试剂 ALV-J 亚群抗体检测试剂盒，购自美国 IDEXX 公司；REV、CAV 和 AEV 抗体检测试剂盒，购自荷兰 BioChek 公司。
1.2 方法
1.2.1 抗体检测 无菌采血，离心分离血清，按照 ALV-J 亚 群、REV、CAV 和 AEV 的 ELISA 抗体检测试剂盒说明书进行抗体检测和结果判定。
1.2.2 数据分析 将检测结果录入Excel，按品种、区域和混合感染类别进行统计和描述，分析不同区域、不同品种鸡群 ALV、REV、CAV 和 AEV 的感染情况及混合感染种类。
2 结果与分析
2.1 不同品种
8 个地方品种鸡群的血清抗体检测结果（表 1）显示：ALV、REV、CAV 和 AEV 平均抗体阳性率分别为 27.02%、72.77%、98.47% 和 76.25%。不同品种鸡群中，4 种病原的阳性率存在一定差异：ALV 阳性率，云龙矮脚鸡最高（50.00%），绿春黄连鸡最低（0）；REV 阳性率，云龙矮脚鸡和宁蒗高原鸡最高（均为 100%），文山土鸡最 低（42.31%）；CAV 阳性率，8 个品种介于96.67%~100%；AEV 阳性率， 绿春黄连鸡较低（28.85%），其余介于 73.33%~95.24%。
表1 云南省8个地方品种鸡鸡群 ALV、REV、CAV、AEV 抗体检测结果
2.2 不同区域滇东、滇西、滇中、滇南和滇北 5 个区域的结果对比（表 2）显示：ALV 阳性率，滇南最低（0），滇中最高（38.33%）；REV 阳性率，滇北（65.43%）、滇西（65.93%）较低，而滇南（86.54%）、滇中（91.67%）较高；CAV 阳性率，各区域均较高，介于95.00%~100%；AEV 阳性率，滇南最低（28.85%），其他地区都在 75% 以上，其中滇东最高（90.48%）。
表2 云南省不同区域 ALV、REV、CAV、AEV 抗体检测结果
2.3 混合感染
2.3.1 不同混合感染类型 4 种病毒的混合感染检测结果（表3~4）显示：8 个地方品种鸡群存在多种混合感染类型，其中二重感染（CAV+REV、CAV+AEV）、三重感染（CAV+REV+AEV）和四重感染（CAV+REV+AEV+ALV）的平均阳性率分别为 32.90%、36.38%、15.90%。
表3 血清样品中 ALV、REV、CAV、AEV 单一感染和混合感染的检测结果（n=2 295）
2.3.2 不同区域混合感染 统计结果（表 5）显示：5 个区域普遍存在不同程度的混合感染，但各区域之间存在一定差异，其中滇东和滇中以三重感染为主，伴有二重和四重感染；滇西和滇北以二重和三重感染为主，伴有四重感染；滇南以二重感染为主，伴有三重感染。
3 讨论
本研究对 2019 年采自云南省 5 个区域 8 个品种地方鸡的 2 295 份血清样品，应用商品化ELISA 试剂盒进行了 ALV、REV、CAV、AEV 血清抗体检测，发现云南省地方鸡鸡群中 ALV、REV、CAV、AEV 的抗体检出率均较高，平均检出率分别为 27.02%、72.77%、98.47%、76.25%，且多以不同病毒组合的混合感染形式存在，尤以REV+CAV+AEV 混合感染率最高（28.32%）。不同区域、不同品种地方鸡群中，除绿春黄连鸡及其所属的滇东地区未检出 ALV 感染外，其余品种和区域内 4 种病毒均有检出，且均表现不同程度的混合感染，仅滇东地区未见四重感染。近年来，颜赟等 对商品肉鸡群免疫抑制性病毒检测的多重感染率为 85.96%，鲍伟华等对宁波市部分鸡场免疫抑制性疫病混合感染的检出率为 80.0%。鸡群中 AEV 感染情况也不容乐观，蛋鸡的 AEV 感染率达到了 62%，放养鸡群更是高达 78%。但未见关于 4 种病毒多重感染的报道。本调查发现，云南省地方品种鸡群中，4 种病毒的多重感染率高达99.78%，说明 4 种病毒共感染现象在云南省地方品种鸡群中非常严重，需要引起高度重视。
ALV、REV、CAV、AEV 多以隐性感染形式存在于临床健康鸡群中。当鸡群因各种应激因素导致抵抗力降低时，这些病毒就会大量复制，从而引起鸡群发病和死亡，并可垂直传播给下一代，导致上述病原难以根除。外来品种带入、自然感染和部分禽用疫苗制品质量不达标，可能是导致这些病原在鸡群中广泛存在的重要原因。云南省地处我国西南边陲，动植物资源丰富，拥有数量庞大的家禽品种资源，但由于交通相对不便、饲养管理水平相对落后等原因，多数家禽品种未能得到很好的开发利用，仍然处于原代状态。种鸡场的种鸡多从农户收 购，而农户以放养和散养为主，其饲养的鸡与野生感染禽类或外来品种病禽接触的概率较高，背景相对复杂。由于上述病毒多呈隐形感染状态，容易被忽视或难以发现，因而增加了病原传播的可能。
目前国家对生产疫苗的 SPF 鸡群检测管理仍不完善，鸡群卫生状况令人担忧。鸡群注射了被病毒污染的疫苗，也可导致病毒抗体阳性。据相关研究报道，我国在部分批次的禽用疫苗中检出了一种或多种免疫抑制性病毒阳性。本调查目的是了解云南省地方鸡群中 ALV、REV、CAV、AEV 的感染情况，采集的血清样品分别来源于 8 个地方品种的种鸡场，未进行 4 种病毒的免疫接种，因此检测出病毒抗体阳性即表明存在病毒感染，至于是自然感染，还是疫苗污染感染，仍需通过病原学方法进行深入探究。
4 种病毒中，ALV、REV、CAV 均可引起免疫抑制。国内一些专家学者研究发现，多种免疫抑制性疾病病原的混合感染，具有协同或促进作用，增强了病毒对鸡体免疫系统的破坏作用，可造成严重的免疫抑制，使机体内免疫应答降低，进而影响其他疫苗免疫抗体的产生，且混合感染抗体阳性率越高，其疫苗免疫抗体水平越低，导致免疫失败的概率越高。即使采取强化免疫，仍有部分个体处于不完全免疫状态，这极大增加了禽病发生概率和治疗难度，特别是给禽流感、新城疫等重大动物疫病的免疫防控带来了巨大压力，存在因免疫失败而引起疫病流行的风险。故开展地方品种种鸡场特别是祖代种鸡场的免疫抑制性疫病及 AEV 的检测，及时淘汰阳性鸡群，建立无病毒的核心群，阻断垂直传播，定期对使用疫苗进行病毒检测，避免使用病毒污染疫苗，同时加强饲养管理，提高鸡群免疫力和鸡场生物安全管理能力，是控制上述病毒流行的有效措施，并可降低疫病特别是重大疫病的发生风险。
4 结论
调查发现，云南省地方品种鸡群的 ALV、REV、CAV、AEV 感染较严重，感染十分普遍，且多以不同组合的混合感染形式存在，虽有一定的地区和品种分布差异，但无明显规律性。建议加强地方品种鸡群中 4 种垂直传播病毒的检测，及时淘汰阳性鸡群，逐渐净化种群，同时定期进行疫苗污染监测，提升饲养管理水平，保障云南地方鸡种质资源的安全健康发展。